ELISA中常见问题及解决方法

ELISA工作站检测因其灵敏度高、特异性好而在临床上得到广泛应用。但是，操作中的每个环节都对检测效果有较大的影响。如果不注意，就可能导致显色不全、图案不全等结果。我们将在操作的各个环节中经常出现的问题的原因和解决方法总结如下，希望能给大家一些启发，提高实验的质量。

Ⅰ。全自动ELISA试剂的选择

选择高质量的检测试剂完全自动化的ELISA并严格按照说明书操作。操作前，在室温下平衡试剂30-60分钟。

Ⅱ。全自动ELISA加样

1.可能的原因:

(1)若血清或血浆样品分离不良，可加样;

(2)手工操作时，样品板过多会导致样品放入培养箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时);

(3)加入样品和加入酶试剂后，酶从孔中飞溅出来。

2.解决方案:

(1)标本为血清:最好将血液自然保存1-2小时，然后3000转离心15分钟;

标本为血浆:必须使用含有抗凝剂的血液标本采集管，采集血液后立即将采集管倒置混合5-10次。一段时间后，以3000转/分离心15分钟;

如果在几天内进行测试，可以放在2-8℃的冰箱中，如果要储存，可以放在-20℃的低温冰箱中。

(2)加入样品后及时将样品放入培养箱中。

(3)加入酶试剂后，用吸水纸擦干微量滴定板表面。

(4)如果使用AT或其他自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。

(5)标本多时，请分批操作。

Ⅲ。全自动ELISA孵育

1.可能的原因:

(1)孵育时无盖或盖，使试样或稀释剂蒸发吸附在孔壁上，难以彻底清洗;

(2)人为延长孵育时间，导致反应孔周围非特异性结合紧密，难以彻底清洗。

2.解决方案:

(1)附封面或封面;

(2)严格按照说明书控制操作时间。

Ⅳ。全自动ELISA洗涤板

1.可能的原因:

(1)手动洗板，液在孔间交叉;

(2)使用半自动洗盘子机洗盘子时，洗涤液量不足，导致洗盘子不完整;洗版针堵塞，导致吸力不全;洗版差，导致洗版效果差;

(3)反应板过多，洗板等待时间过长。

2.解决方案:

(1)确保洗液填满小孔，洗针畅通。洗完板后，最好在吸水纸上轻轻拍干(选择干净、无或少灰尘的吸水材料);

(2)合理安排，或多使用洗版机。

Ⅴ。全自动ELISA显色方法

1.可能的原因:

(1)制备后显影液放置时间过长或使用过期显影液的;

(2)当显影剂加入时，它会从孔中飞溅出来，导致液体回流。

2.解决方案:

(1)显色剂应尽量在使用前准备好，过期的显色剂不宜使用。没有使用浅蓝色TMB显色器;

(2)添加样品时防止显影液流出;

(3) A、B液体应避免与金属设备接触。

Ⅵ。全自动ELISA终止

可能原因:如添加停止溶液时气泡增多，导致假阳性增加。因此，在添加止水液时，应避免产生气泡。

Ⅶ。全自动酶联免疫吸附试验的平板读数

如果读板时发现板底不干净，请确保微量滴定板是干净的。因此，在整个操作过程中，保证ELISA板不接触次氯酸，尽可能实现全自动ELISA检测标准的自动化，有效提高了检测质量。此外，选择合格的ELISA试剂也很重要工作站的供应商。

在实际操作中，除了选择好的试剂外，还必须严格遵循操作步骤。同时要做好室内质量控制和外部质量评价，以严谨的工作作风对每一个标本进行检验，保证检验质量。目前，国内已有相当多的单位配备了全自动微板阅读器，为实现全自动ELISA标准化检测、提高检测质量发挥了重要作用。