临床全自动ELISA的常用模式

根据抗原和抗体测定方法的不同，ELISA自动测定方法有很多，如直接法、间接法、双抗体夹心法(直接、间接)、竞争抑制法(直接、夹心等)、捕获法等。在临床实验室中，常用的ELISA检测方式有双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、竞争抑制法和捕获法。

在抗原的测定中，最常用的测定蛋白质大分子抗原的方法是双抗体夹心法。对于只有一个表位的小分子，采用竞争抑制法;抗体测定通常采用间接法、双抗原夹心法、竞争抑制法和捕获法。

1.ELISA工作站双抗体夹心法

对于含有多个表位的大分子蛋白质，其ELISA工作站用双抗体夹心法测定是相当简单的。现有的商业蛋白抗原检测试剂盒基本都采用这种检测方式。

首批用于抗原双抗体夹心检测的全自动ELISA试剂盒均采用“两步法”。后来，试剂厂家为了缩短检测时间，简化操作步骤，逐渐引入了“一步法”医疗测试设备．

目前，在我们的临床实验室中，HBsAg、甲胎蛋白(α-胎蛋白，αFP)、前列腺特异性抗原(PSA)、CA系列标志物、hCG、激素等大分子抗原的检测基本采用一步法。与两步法相比，一步法操作简单，但也有其固有的缺点。如果处理不当，由于钩效应的存在，双抗体夹心免疫分析结果可能为假阴性或低定量结果。

小分子半抗原如地高辛、茶碱和其他药物和激素如T3、T4、睾酮可能只有一个表位。或者由于分子太小，在与一种抗体结合后，由于空间位阻而不能与另一种抗体结合，因此不能使用双抗体夹心法进行测量。ELISA工作站只能使用竞争抑制法。

在这种检测模式下，需要获得小分子和酶的组合。小分子酶偶联物的制备不像抗体酶偶联物那么简单，其纯化也相当困难。小分子结合酶与游离酶的分子量差小，用一般分子筛法难以分离。因此，有人试图在二聚体或多聚体小分子合成的基础上，建立双抗体夹心竞争ELISA法测定小分子。提高了测定方法的灵敏度和特异性。

测量人体产生的对抗传染病病原体抗原的抗体，对人体也是如此抗体检测组件．在难以获得高纯度和定义明确的抗原之前，或当抗原比较复杂时，一般采用间接法。

目前临床上常用的丙型肝炎病毒抗体(anti-HCV)检测项目均为间接法，间接法用于检测抗体。严格来说，只测量抗体的IgG类，不涉及IgM和IgA类。这是由酶标记的二抗确定的。目前，一些特异性IgⅢ抗体检测试剂盒采用间接法。

双抗原夹心法检测的抗体包括所有类型的特异性抗体，不受非特异性IgG干扰。因此，双抗原夹心法检测抗体的灵敏度和特异性均高于间接法。目前，为了提高抗体测定的灵敏度，ELISA工作站的试剂盒基本采用双抗原夹心法，除了anti-HCV因其抗原的存在而更加复杂外。

抗体的测定一般不使用竞争法。当抗原中的杂质难以去除或抗原的结合特异性不稳定时，ELISA工作站可使用该模式进行抗体的测定。最典型的是乙肝病毒核心抗体(HBcAb)和乙肝病毒e抗体(HBeAb)的测定。