PCR技术原理和荧光PCR方法的综合解释

Ⅰ。PCR技术原理

今年，Covid-19正在世界各地肆虐，每个人都必须听说过核酸测试。在流行病的核酸检测中，PCR荧光技术起着核心作用，可以帮助检查员快速，准确地确定它们是否被Covid-19感染。

那么PCR技术究竟是什么？

PCR是聚合酶链反应的缩略图。简而言之，PCR由三个基本反应步骤组成：高温变性 - 低温退火 - 中等温度延伸：

1. DNA的变性变得单股

在将模板DNA加热至约95℃的一段时间后，将模板DNA的双链解离成单链，使得它可以与底漆结合并为下一轮反应制备。

2.低温退火

在模板DNA被降解成单链后，将温度降至约55℃，并将引物与模板DNA单链的互补序列配对。

3.中温延伸

在Taq酶的作用下，DNA模板和引物缀合物使用DNTP作为反应原料和靶序列作为模板，根据基础配对和半保留复制的原理，最后合成新的半保留复制链与模板DNA链互补。。

目前，大多数由中国药物管理局批准的Covid-19检测试剂使用荧光PCR方法来检测Covid-19。

荧光PCR方法是指向PCR反应体系中添加荧光基团。随着PCR扩增的进展，反应产物继续积累，荧光信号强度也成比例地增加。荧光扩增曲线图，PCR荧光过程的实时检测。

1.材料

PCR通常由PP材料制成，因为PCR / QPCR消耗品通常与试剂或样品直接接触，而聚丙烯（PP）材料是一种生物惰性材料，表面不易粘附到生物分子上，具有良好的耐化学性温度。耐受性（可在121°C下高压灭菌，也可以在热循环期间承受温度变化）。PCR消耗品都是PP材料。

2. PCR管/板块

如何选择不同卷的PCR管/板？

选择用途：根据具体的实验要求选择合适的产品。PCR管的体积主要满足PCR反应的要求。PCR管是低至中吞吐量PCR / QPCR实验的理想选择，单管和条带是两个最常用的格式。

单个管提供灵活性，可以设定要运行的确切反应数。或者，可以选择单个0.5ml管以用于更大的反应体积。

联轴器通常以8或12管格式提供，具有分开或盖帽。与单通道和多通道移液器兼容，用于低频和中吞吐量实验。用帽子的条带独立打开和关闭样品管，以防止样品污染。

3.墙壁厚度

管壁厚度直接影响导热系数，极薄的壁厚优化热传递并减少循环时间。超薄壁塑料比标准版本缩短约50％，进一步降低了热屏障，导致更快，更强大的响应。PCR消耗品都是超薄管壁。

4.颜色

PCR板通常以各种不同的颜色格式可用，以促进样本的视觉分化和鉴定，尤其是在高通量实验中。对于普通的PCR反应，可以使用透明或有色PCR管，透明PCR管对样品分类管理更有助于。

虽然塑料的颜色对DNA扩增没有影响，但建议高质量的白色PCR消耗品用于QPCR。由于QPCR需要实时定量检测荧光信号强度，因此需要敏感和精确的荧光信号传输。实验表明，与传统的透明PCR产物相比，白PCR产物可以最大程度地反映荧光信号，减少空间信号的交叉污染，并获得实时荧光定量PCR的结果。

不同品牌的仪器，由于荧光探测器的位置设计不同，请参阅制造商推荐的材料。对于Bio-Rad CFX或Roche 480实时PCR仪器，制造商建议使用White PCR板。由于PCR板是白色或透明的，并且具有各种规格，适用于市场上的普通PCR仪器。华体会游戏app